Jeder weiß, dass es viele Labore gibt. Wie viele Menschen kennen sich also mit PCR-Laboren aus? Und was sind die Grundvoraussetzungen für die Gestaltung von PCR-Laboren? Dann wird es VOLAB Xiaobian geben, das mit allen besprochen werden kann ~
1, PCR-Laborlayout
Das Labor für PCR-Amplifikationstests ist im Prinzip in vier separate Arbeitsbereiche unterteilt: Bereich für die Lagerung und Vorbereitung von Reagenzien, Bereich für die Probenvorbereitung, Bereich für die Vorbereitung und Amplifikation des Amplifikationsreaktionsgemischs sowie den Bereich für die Analyse von Amplifikationsprodukten. Um Kreuzkontaminationen zu vermeiden, muss das Betreten jedes Arbeitsbereichs strikt in einer einzigen Richtung erfolgen, d. Der Reagenzien- und Probentransfer zwischen den einzelnen Versuchszonen sollte über ein Transferfenster erfolgen.
2. Design und Druckregelung von Laborklimaanlagen, Lüftungssystemen
Für PCR-Labore gelten keine strengen Reinigungsanforderungen. Um jedoch die Möglichkeit einer Kreuzkontamination zwischen den verschiedenen Versuchsbereichen zu vermeiden, empfiehlt sich die Verwendung eines Luftverteilungssystems mit vollem Luftstrom. Gleichzeitig sollte das Verhältnis von Senden und Absaugen streng kontrolliert werden, um die Druckanforderungen jedes Versuchsbereichs sicherzustellen.
2.1, Probenvorbereitungsbereich
Die Haupttätigkeiten in diesem Bereich sind die Konservierung von Proben, die Extraktion von Nukleinsäuren (RNA, DNA), die Lagerung und deren Zugabe zu Amplifikationsreaktionsröhrchen sowie die Bestimmung der DNA-Synthese. Die Anforderungen an den Druckgradienten in diesem Bereich sind: Überdruck relativ zum angrenzenden Bereich, um eine Aerosolkontamination aus dem angrenzenden Bereich in diesen Bereich zu vermeiden. Darüber hinaus sollte aufgrund der Möglichkeit einer durch Aerosole-bedingten Kontamination während des Ladevorgangs unnötiges Gehen in dem Bereich vermieden werden.
2.2. Bereich zur Lagerung und Vorbereitung der Reagenzien
Die Hauptoperationen in diesem Versuchsbereich sind die Vorbereitung von Lagerreagenzien, die Abgabe von Reagenzien und die Herstellung von Hauptreaktionsmischungen. Reagenzien und Materialien, die zur Probenvorbereitung verwendet werden, sollten direkt in diesen Bereich transportiert werden und dürfen nicht durch andere Bereiche gelangen. In diesem Bereich müssen Reagenzrohstoffe gelagert und dort zu den erforderlichen Lagerreagenzien aufbereitet werden. Es gibt keine strengen Anforderungen an die Kontrolle des Luftdrucks.
2.3, Bereich der Amplifikationsproduktanalyse
Die Hauptoperation in diesem Bereich ist die Bestimmung amplifizierter Fragmente. Dieser Bereich ist die Hauptkontaminationsquelle des amplifizierten Produkts. Daher gelten für diesen Bereich folgende Anforderungen an den Druckgradienten: Unterdruck gegenüber dem angrenzenden Bereich, um eine Diffusion amplifizierter Produkte aus dem Bereich in andere Bereiche zu verhindern.
2.4, Vorbereitung der Amplifikationsreaktionsmischung und Amplifikationszone
Die Hauptoperation in diesem Bereich ist die DNA-Amplifikation. Darüber hinaus kann in diesem Bereich auch die Zugabe der vorbereiteten DNA-Vorlage (aus dem Probenvorbereitungsbereich) und der Hauptreaktionsmischung (aus dem Reagenzienlager- und -vorbereitungsbereich) zur Herstellung einer Reaktionsmischung usw. durchgeführt werden. Die Anforderungen an den Druckgradienten in diesem Bereich sind: Unterdruck relativ zum angrenzenden Bereich, um ein Austreten von Aerosolen aus dem Bereich zu verhindern. Um die Belastung durch Aerosole zu vermeiden, sollten unnötige Spaziergänge in der Umgebung minimiert werden. Einzelne Vorgänge wie die Probenahme sollten in der Reinbank durchgeführt werden.
3.1. Strikte Aufteilung des Arbeitsbereichs
(1) Die Einstellung jedes Versuchsbereichs ist angemessen;
(2) Jeder Versuchsbereich sollte mit deutlichen Markierungen versehen sein (z. B. auffällige Hausnummern oder unterschiedliche Grundfarben usw.), um Verwechslungen zwischen Ausrüstungsgegenständen und Reagenzien in verschiedenen Versuchsbereichen zu vermeiden.
3.2, angemessene Systemeinstellungen
(1) Angemessene Einstellung des Lüftungssystems der Klimaanlage. Versuchen Sie, die Klimaanlage vollständig zu nutzen.
(2) Eine strikte Kontrolle des Luftstromdrucks gewährleistet unterschiedliche Druckanforderungen in verschiedenen Versuchsbereichen.
3.3, die Standardoperation
(1) Die Techniker des Amplifikationsinspektionslabors müssen -am Arbeitsplatz- eine Schulung absolvieren und dürfen erst nach bestandener Schulung klinische Genamplifikationstests durchführen;
(2) Während des Versuchsbetriebs muss der Bediener Handschuhe tragen und diese häufig austauschen. Darüber hinaus ist die Verwendung von Einwegkappen während des Betriebs auch eine wirksame Maßnahme zur Vermeidung von Kontaminationen;
(3) Die Reinigungsarbeiten erfolgen rechtzeitig und ordnungsgemäß. Nach Beendigung des Experiments muss der Bereich sofort gereinigt werden. Zusätzlich zu den herkömmlichen Desinfektionsflüssigkeiten zur Desinfektion von Oberflächen oder zur Bestrahlung und Desinfektion von UV-Lampen sollten einige Versuchsgeräte auch einer Hochdrucksterilisation unterzogen werden.
3.4, strenges Management
(1) Kontrollieren Sie streng das Personal, das das Labor betritt und verlässt. Personen, die nichts mit dem Experiment zu tun haben, dürfen das Labor nicht nach Belieben betreten oder verlassen und müssen bei Bedarf unabhängige Durchgänge und Türen zum und vom gesamten Experimentierbereich einrichten.
(2) Minimieren Sie unnötige Spaziergänge im Versuchsbereich, um die Möglichkeit einer Kreuzkontamination zu verringern.
(3) Der Analysebereich des amplifizierten Produkts ist die wichtigste Kontaminationsquelle des amplifizierten Produkts. Die Abfalllösung darf nicht im Labor entsorgt werden. Es muss in der Desinfektionslösung eingeweicht und dann an einem Ort außerhalb des Labors entsorgt werden. Die verwendeten Spitzen sind Einwegspitzen. Die Materialien sollten außerdem desinfiziert und sterilisiert und anschließend einheitlich behandelt werden, beispielsweise durch Verbrennung;
(4) Im Bereich der Analyse von Amplifikationsprodukten können bestimmte Genmutationen und toxische Substanzen verwendet werden. Besonderes Augenmerk sollte auf den Sicherheitsschutz des Experimentators gelegt werden.
3.5. Komplette Laborausstattung
Komplette laborunterstützende Einrichtungen sind notwendige Voraussetzungen für die Sicherstellung der experimentellen Arbeit. Die entsprechenden Geräte und Instrumente sollten entsprechend den unterschiedlichen Versuchsinhalten jedes Labors ausgestattet sein, wie z. B. Reinstbänke, Zentrifugen und Probenzuführungen.